La Medicina Natural Combinada Traumeel (Tr14) Mejora la Resolución de la Inflamación al Promover la Biosíntesis de Mediadores Especializados Pro-Resolutivos
Paul M. Jordan, Emeline van Goethem, Andrea M. Müller, Kathrin Hemmer, Virginie Gavioli, Vincent Baillif, Yvonne Burmeister, Natascha Krömmelbein, Marc Dubourdeau, Bernd Seilheimer and Oliver Werz..
Presentamos una investigación sobre el medicamento natural combinado Traumeel (Tr14) y su impacto en la resolución de la inflamación. Los AINEs son medicamentos muy populares para el dolor e inflamación que presentan efectos adversos gastrointestinales, cardiovasculares y renales, además de no ser eficientes para promover la resolución y reparación tisular. El proceso de inflamación aguda es normalmente autolimitado y termina de manera temporal, donde la resolución es una parte activa que lleva a la reparación y regeneración tisular, caracterizándose por la normalización de gradientes de quimiocinas y eliminación de neutrófilos apoptóticos. En cuanto a los mediadores lipídicos en la inflamación, se distinguen los pro-inflamatorios como leucotrienos y prostaglandinas, y los pro-resolutivos especializados (LMs) como lipoxinas, resolvinas, maresinas y protectinas, siendo estos últimos capaces de acelerar la reparación tisular sin causar inmunosupresión. Las investigaciones previas sobre Traumeel han demostrado su influencia en reacciones inflamatorias, reduciendo edema e IL-6 en modelos animales, afectando genes relacionados con reparación de heridas y mostrando efectos positivos en ensayos clínicos controlados. El estudio actual se centra en evaluar la capacidad de Tr14 para promover la resolución de la inflamación, utilizando un modelo de peritonitis inducida por zimosán en ratones y estudiando sus efectos en el reclutamiento de leucocitos, perfiles de mediadores lipídicos, genes para enzimas biosintéticas y macrófagos derivados de monocitos humanos. Los resultados sugieren que Traumeel actúa como potenciador de la fase de resolución de la inflamación aguda, aumentando los niveles de mediadores pro-resolutivos especializados (LMs), lo que podría representar una alternativa prometedora a los AINEs convencionales (1).
Tr14 Afecta las Vías de los Mediadores Lipídicos y Promueve la Resolución de la Inflamación en la Peritonitis Murina
Se realizaron dos configuraciones experimentales diferentes: en la primera, Tr14 se administró antes del zimosán, y en la segunda, se administró después. Los resultados principales muestran que en la primera configuración, Tr14 a dosis alta aumentó significativamente el número total de células en el peritoneo después de 4 horas, mientras que la dosis baja disminuyó significativamente el número de neutrófilos polimorfonucleares a las 8 horas. Tr14 también acortó el intervalo de resolución y aumentó el reclutamiento de monocitos/macrófagos y eosinófilos.
En cuanto a los mediadores lipídicos, Tr14 no afectó marcadamente su producción general, pero incrementó significativamente la proporción de productos derivados de 12/15-LOX y mediadores pro-resolutivos especializados (LMs) frente a los productos derivados de COX, sugiriendo que Tr14 promueve un cambio de mediadores pro-inflamatorios hacia pro-resolutivos. En la segunda configuración experimental, cuando Tr14 se administró después del zimosán la dosis baja aumentó significativamente el número de macrófagos residentes y linfocitos en la fase post-resolución. Notablemente, Tr14, especialmente a dosis bajas, incrementó significativamente los niveles de LMs como RvD2, RvD5 y LXA4 después de 24 horas y durante el tiempo post-resolución. Estos hallazgos sugieren que Tr14 tiene efectos beneficiosos en la resolución de la inflamación, particularmente a través de la modulación de mediadores lipídicos pro-resolutivos (Figura1 y 2) (1).
Figura 1 Efectos de Tr14 en la resolución de la inflamación y las vías de mediadores lipídicos cuando se administra antes de inducir peritonitis
El panel A muestra el esquema experimental: Tr14 se administró durante 6 días antes de la inyección de zimosán, y se recolectaron muestras a las 4, 8 y 24 horas. B) Presenta el conteo de células en el peritoneo. La dosis alta de Tr14 (3 mL/kg) aumentó significativamente el número total de células a las 4 horas. C) Muestra la infiltración de neutrófilos (PMNs) y los índices de resolución. La dosis baja de Tr14 (1.5 mL/kg) disminuyó significativamente el número de PMNs a las 8 horas y acortó el intervalo de resolución (Ri). D) Presenta los niveles de citocinas/quimiocinas a las 4 horas post-zimosán, incluyendo IL-6, TNF-α, MCP-1, eotaxina-1, KC (IL-8) e IL-10. E) Muestra la proporción entre la citocina antiinflamatoria IL-10 y la suma de citocinas proinflamatorias. F) Presenta los niveles de expresión de ARNm de enzimas biosintéticas de mediadores lipídicos y genes relacionados con sus receptores. G) Muestra los niveles de diversos mediadores lipídicos (14-HDHA, 17-HDHA, PD1, MaR1, RvD2, RvD5, LXA, LTB4, PGE2, TXB2) en el exudado peritoneal a las 8 y 24 horas. H) Presenta la proporción entre productos 12/15-LOX y SPMs versus productos COX, mostrando que Tr14 promueve un cambio hacia mediadores pro-resolutivos. Los asteriscos (**) indican significación estadística (p < 0.01) comparado con el vehículo (control) para cada punto temporal.
Figura 2 Efectos del Tr14, administrado por vía intraperitoneal 4 y 8 horas después de la inducción de peritonitis murina, sobre la resolución de la inflamación y las vías de mediadores lipídicos
El panel A presenta el diseño experimental, mostrando la administración de Tr14 y zimosán para inducir la peritonitis. El panel B cuantifica las células en los lavados peritoneales, comparando ratones tratados y no tratados, mientras que el panel C se enfoca en el número de neutrófilos PMN infiltrados, incluyendo varios índices de resolución como Ymax, Tmax, Y50, T50 y Ri. El panel D examina los niveles de diversas citocinas y quimiocinas (IL-6, TNF-α, MCP-1, eotaxina-1, KC e IL-10) 8 horas post-zimosán, complementado por el panel E que muestra la proporción entre la citocina antiinflamatoria IL-10 y las proinflamatorias. Los paneles F y G se centran en los mediadores lipídicos, donde F muestra los niveles de LM en exudados a las 24 y 360 horas (analizados por UPLC-MS-MS), y G presenta las proporciones de productos 12/15-LOX y SPMs versus productos COX, con significancia estadística marcada por asteriscos (p < 0.05 y p < 0.01) en comparación con el vehículo control.
Tr14 Mejora las Acciones Eferocíticas de los Macrófagos In Vivo
La eferocitosis de células apoptóticas y residuos celulares por macrófagos reclutados es un paso esencial en el proceso de resolución que es fuertemente promovido por los SPMs (the specialized pro-resolving mediators). El efecto del Tr14 en la efrocitosis durante la peritonitis murina, administrándolo por vía intraperitoneal durante 6 días antes de inducir inflamación con zimosán, no alteró significativamente el número de PMNs (neutrófilos) apoptóticos y no apoptóticos, pero sí aumentó significativamente el número de macrófagos eferocíticos a las 4 horas y mejoró la proporción de macrófagos eferocíticos versus PMNs no apoptóticos. En conjunto, los datos muestran que Tr14 mejora la formación de SPM y, posiblemente como consecuencia, promueve la eferocitosis de PMNs apoptóticos por macrófagos in vivo durante la peritonitis en ratones (Figura 3) (1).
Figura 3 Tr14 mejora las acciones eferocitóticas de los macrófagos en la peritonitis murina
El panel A muestra dos gráficos que representan los PMNs no apoptóticos y apoptóticos (tempranos y tardíos) medidos a diferentes tiempos, identificados mediante marcadores específicos (Ly6G+, F4/80-, annexin-V+/-). El panel B revela un aumento significativo en el número de macrófagos eferocitóticos (F4/80+, Ly6G+) en los grupos tratados con Tr14 comparado con el vehículo. Complementariamente, el panel C presenta la proporción entre macrófagos eferocitóticos y PMNs no apoptóticos a las 4 horas post-zimosán, mientras que el panel D muestra la intensidad media de fluorescencia de PMNs Ly6G+ en macrófagos eferocitóticos después de 4 horas, expresada como porcentaje de incremento versus el vehículo, indicando la capacidad de captación de PMNs por macrófago. Los datos se obtuvieron mediante análisis de citometría de flujo de exudados peritoneales recolectados a las 4, 8 y 24 horas.
Tr14 Aumenta la Biosíntesis de Mediadores Lipídicos Mediada por 15-Lox-1 en Macrófagos M2 Humanos
Se investigó el efecto del Tr14 en la biosíntesis de mediadores lipídicos en células inmunes humanas, utilizando macrófagos derivados de monocitos (MDM) polarizados hacia fenotipos M1 y M2, que fueron pretratados con Tr14 (0.1 o 10%) por 15 minutos y expuestos a S. aureus como estímulo. Los resultados mostraron que el Tr14 no presentó efectos citotóxicos en MDMs durante 48 horas y, a diferencia de antiinflamatorios clásicos como ibuprofeno, diclofenaco, zileuton y BLX-3887, no afectó significativamente la biosíntesis de mediadores lipídicos en incubaciones cortas. Sin embargo, en tratamientos largos (48h), aumentó la formación de mediadores lipídicos mediados por 15-LOX-1, especialmente mejorando la producción de SPMs en macrófagos M2 y disminuyendo la proporción de LTB4 y PGE2 versus SPMs. Estos hallazgos sugieren que el Tr14 modifica la producción de mediadores lipídicos en macrófagos M2 hacia un perfil más pro-resolutivos durante la polarización de macrófagos, indicando un papel importante en la resolución de la inflamación (Figura 4) (1).
Figura 4 La dosis alta de Tr14 aumenta la biosíntesis de mediadores lipídicos mediada por 15-LOX-1 en macrófagos M2 derivados de monocitos humanos
El panel A muestra el primer protocolo, donde el Tr14 se administra a macrófagos ya polarizados antes de la incubación con S. aureus, mientras que el panel B presenta los resultados de este protocolo para macrófagos M1 y M2 tratados con diferentes concentraciones de Tr14 (0.1% o 10%) o vehículo, mostrando los niveles de varios mediadores lipídicos (SPMs, 12-LOX, 15-LOX, COX, 5-LOX). El panel C introduce un protocolo alternativo donde el Tr14 se administra antes de la polarización de los macrófagos, y el panel D muestra los resultados correspondientes en macrófagos M0 que luego fueron polarizados a M1 (con LPS/IFN-γ) o M2 (con IL-4). Finalmente, el panel E presenta gráficos circulares que ilustran la proporción relativa de PGE2, LTB4 y SPMs en macrófagos M2 tratados con diferentes concentraciones de Tr14. Todo el análisis se realizó mediante UPLC-MS-MS con muestras de tres donantes diferentes, utilizando ANOVA de una vía con prueba de Dunnett para el análisis estadístico.
Conclusiones
El estudio demuestra que el Tr14 mejora la biosíntesis de productos 12-/15-LOX y SPMs, lo cual fue verificado tanto en un modelo de peritonitis murina inducida por zimosán como en macrófagos derivados de monocitos humanos expuestos a exotoxinas bacterianas. De igual manera, en el modelo de peritonitis murina, el Tr14 ratifico una influencia positiva en el índice de resolución de la inflamación y apoyó el proceso de eferocitosis. Estos hallazgos posicionan al Tr14 como un agente inmunoresolutivo con diversas acciones que promueven la resolución de la inflamación, sugiriendo un potencial beneficio para pacientes que sufren de inflamación no resolutiva debido a defectos en la respuesta de resolución.
Referencia
- Jordan, P. M., van Goethem, E., Müller, A. M., Hemmer, K., Gavioli, V., Baillif, V., … & Werz, O. (2021). The natural combination medicine traumeel (Tr14) improves resolution of inflammation by promoting the biosynthesis of specialized pro-resolving mediators. Pharmaceuticals, 14(11), 1123.
